RNA干扰介导的基因沉默是目前最经济、最有效的基因敲除技术。siRNA 转染与传统质粒DNA转染有所不同。RNA比DNA更不稳定,转染试剂和siRNA形成更弱的复合物。而且RNAi要求将其有效地转染到胞浆,而基因表达要求将DNA转染到核内。故RNA转染需要特异性的转染试剂。
由于RNA干扰可以通过多种RNA转染来实现,如化学合成的siRNA、质粒表达siRNA、shRNA和miRNA等。根据他们不同的分子特性,我们需选择最适的转染试剂:
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RNAi方法
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应用产品
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质粒表达siRNA、shRNA 、miRNA
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化学合成siRNA
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INTERFERin™
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化学合成的siRNA 和质粒DNA共转染
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(一)INTERFERinTM简介:
Polyplus公司最新研发出来的新一代SiRNA转染试剂。此转染试剂加快了与细胞表面糖蛋白的结合,从而促进了细胞的内吞。INTERFERinTM独特的特点是在内吞时,以及激发内涵体肿胀和破裂时可以保护SiRNA。最终INTERFERinTM和siRNA(nM)推荐从内涵体中释放。这些特点降低了非靶细胞特异性作用,从而增强了高特异性的基因沉默。
(二)INTERFERinTM转染siRNA的特点和优势
- 很低浓度的siRNA就可以产生很高的基因沉默效率 :INTERFERinTM可转染细胞系广,且1 nM siRNA可达到90%以上基因沉默效率。
- 细胞毒性极小:INTERFERinTM对比其他siRNA转染试剂,对细胞毒性极小,转染后细胞状态最好。
- 实验操作简单:INTERFERinTM为即用型的siRNA转染试剂,并且此试剂不受血清和抗生素的影响,操作简单快速。
- 适用细胞类型广,沉默效率高
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贴壁细胞 (at 1 nM siRNA conc.)
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A549
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Luciferase
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> 90%
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HeLa
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GAPDH
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Caski
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GAPDH
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SiHa
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GAPDH
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MCF7
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GAPDH
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NIH-3T3
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Vimentin
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原代细胞(at 1 nM siRNA conc.)
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MEF Murine embryonic fibroblasts
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GAPDH
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> 90%
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Human fibroblasts
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GAPDH/ Lamin A/C
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Human hepatocytes
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GAPDH
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悬浮细胞 (at 5 nM siRNA conc.)
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K562
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GAPDH
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> 80%
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THP-1
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GAPDH
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