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液相蛋白流式检测——Flowcytomix
最近几年,基于微球技术的多参数检测技术越来越受到科研工作者的欢迎和青睐;与传统ELISA 技术只能检测一个指标相比,该技术能够实现自一份标本中同时检测多种指标,前几年开始出现的Luminex技术堪称其中的代表和佼佼者。但是因为Luminex技术是基于Luminex仪器平台的,而该仪器价值比较高,对于目前的众多实验室来讲,拥有一台Luminex仪器不是那么容易的事情。相对来讲,流式细胞仪的仪器和技术成熟,很多实验室都拥有流式细胞仪。因此在流式细胞仪的平台上进行多参数检测是相对容易的事情。
Bender Medsystems公司位于奥地利的首都维也纳,是一家专业从事细胞因子和可溶性CD 分子检测的试剂公司。最近几年,该公司开发了一系列在流式细胞仪平台上进行多参数细胞因子或其它可溶性分子检测的技术――FlowCytomix技术。该技术主要是使用两种大小的微球,每种微球内部标记5 种不同强度的荧光染料;因此可以实现同时检测10 种细胞因子或者可溶性黏附分子的目标。除了完整的试剂盒外,还提供自由组合菜单,方便科研人员根据自己的要求来选取检测指标。与其它同类产品不同的是,FlowCytomix适用于所有流式细胞仪的平台,并且免费提供非常容易操作的分析软件(最新的FlowCytomixPro Software 2.1,在PC 机上即可轻松获得检测结果。在FlowCytomix系列产品中,除了常规的细胞因子以外,最具有特色的是心血管相关指标和黏附分子检测:包括sCD40L、IL-6、IL-8、MCP-1、sE-selectinsICAM-1sICAM-3sPECAM-1sP-selectinsVCAM-1对于临床诊断心血管疾病具有非常重要的意义。
Flowcytomix技术原理
 
2大小的微球(4.4um5.5um),内部分别标记 9、11种不同强度的荧光染料(远红外荧光,可被ArgonHeNe 甚至紫外光源激发,发射波长690nm),构成了20种可以同时被流式细胞仪加以识别和区分的不同微球;故可以同时在同一份标本中进行多达20种指标的检测
                                                   2组微球,大小不同:
A组: 4.4um
B 组:  5.5um
 
每组微球内部标记不同强度荧光染料:
A组: 11种荧光强度
B组: 9种荧光强度
 
 
Flowcytomix技术优点 
1.高通量可使用96 孔板,每个标本可同时检测多达20 个指标。
2、根据需要自由组合检测指标:研究人员可以根据实验需要,自由组合检测指标,最多可同时检测20个指标。FlowCytomix试剂盒提供至少用于4 次标准曲线的试剂量,满足随时检测的需要,去除了标本数量的限制。
3、操作简单,节约成本:研究人员可根据条件,选择使用96 孔滤膜板(试剂盒提供)或者试管进行操作;一次操作,可得到多个指标的结果,整个流程只需要3.5小时,极大的节约了人力和物力成本。
4、需要标本量少:突破传统的ELISA对标本需要量大的要求,FlowCytomix仅仅25ul的标本就可满足检测多个指标的要求。大大节省标本,尤其适用于珍贵标本的检测。
5、适用标本范围广FlowCytomix 适用于血清、血浆、全血、细胞培养上清和其它体液。
6、同样的灵敏度,更宽的检测范围:
在保证等同于(或强于)传统ELISA的灵敏度的同时,FlowCytomix将检测范围扩大到了13.7-20000pg/ml,最大程度的保证了所有标本的适用性。
 Th1/Th2细胞因子Flowcytomix与ELISA灵敏度比较
 
Human Analyte
FlowCytomix, BMS810FF
ELISA
IL-1b
5.2 pg/ml
0.3 pg/ml
IL-2
20.0 pg/ml
15.0 pg/ml
IL-4
15.7 pg/ml
2.0 pg/ml
IL-5
10.0 pg/ml
2.2 pg/ml
IL-6
0.8 pg/ml
1.4 pg/ml
IL-8
7.9 pg/ml
11.0 pg/ml
IL-10
1.5 pg/ml
2.0 pg/ml
IL-12p70
11.6 pg/ml
3.2 pg/ml
IFN-g
2.2 pg/ml
1.5 pg/ml
TNF-a
17.5 pg/ml
5.0 pg/ml